运行服务
单位检索
关键词检索

Microflex LRF MALDI-TOF基质辅助激光解析飞行时间质谱技术应用案例

Microflex MALDI-TOF质谱仪是国家纳米科学中心公共技术服务中心购置的大型仪器设备,由国家纳米科学中心纳米生物效应与安全研究室实验平台负责运行服务,这台设备是布鲁克·道尔顿公司高性能台式质谱仪,具有高分辨率、高重现性、高通量等特点,配有时间延迟功能的离子源、60Hz盒式氮气激光器、线性和反射模式的飞行管、正负离子检测模式、Compass for Flex软件包等功能,可实现自动化检测及蛋白质组学分析、核酸分析、高分子聚合物分析等,为生物化学、医药、材料科学,尤其是临床蛋白质组学和生物标记物研究领域提供有力的技术保障。

该设备自2011年正式投入使用以来,使用机时已超过300小时,收集了大量实验数据。先后为纳米中心多个研究小组提供高水平测试服务,有效地支撑了多项重大科学研究计划。目前实验数据正在持续分析整理中。

应用案例:

正在承担纳米中心聂广军研究员课题组一项基金委海外合作项目“基于纳米蛋白芯片技术建立定量检测hepcidin的方法并用于疾病早期诊断(项目批准号:81128007)”。人铁调素hepcidin主要由肝脏表达并分泌的富含半胱氨酸多肽,机体铁代谢平衡的重要调节激素,对其含量的测定可以为贫血、铁超载等铁代谢失调疾病、慢性肾脏疾病和炎症反应的诊断提供重要信息。该研究中选用MALDI-TOF设备的反射/正离子模式检测其在人体液中(血清、尿液)的含量及变化情况。检测时选用了合适范围的标准品校正、激光能量设定、数据采集方法设定和图谱分析设定,得到了hepcidin最低检出线、标准曲线、准确度和重复性等实验结果。比较已有的检测方法,重点改进样品前处理技术,不仅方法简单、快度、高通量,还提高了质谱检测的灵敏度和分辨率。部分研究结果已经整理成文章,目前正在投稿中,(Fan Jia, et al. Nanopore film based enrichment and quantification of low abundance peptide biomarker from human bodily fluids, Clinical Chemistry, 2013, submitted.)。关于不同类型铁代谢疾病的大量病患样本的质谱检测和数据统计分析仍在进行中,这些研究都将为hepcidin作为生物标记物应用于个性化临床诊断奠定基础。

附图如下:

 

人体液多肽MALDI-TOF质谱图:a. 未经前处理的样品在1000-4000 Da范围内观察不到多肽的质谱峰;b. 处理后可以看到血清中多肽质谱峰图,并且观察到一个分子量与hepcidin相同的多肽峰,即单同位素质谱峰为2788.17Da峰;c. 处理后尿液中多肽质谱峰图,除了2788.17Da峰外,还能看到hepcidin其他两种无功能异构体的质谱峰。

 

附件下载:
版权所有2013 中国科学院北京纳米科学大型仪器区域中心 联系我们
牵头单位:国家纳米科学中心
地址:北京市海淀区中关村北一条11号 | 邮 编:100190 | 电话:010-82545544 | Email:yfxiong@nanoctr.cn